本发明公开从乳酸铵发酵料液中提取及分离L-乳酸的方法，包括如下步骤：(1)乳酸铵发酵料液预处理；(2)乳酸铵的硫酸酸解；(3)将酸解料液和耦合吸附剂分别加入到离心萃取机中，在15-25摄氏度时耦合吸附提取L-乳酸；(4)将有机相和水相分离；(5)将有机相和55-65摄氏度的热水分别加入到离心萃取机中，反耦合吸附提取L-乳酸。本发明能够快速地将L-乳酸从乳酸酸解液中提取及分离出来，改变现有从L-乳酸中将各种杂质逐一分离的工艺路线，利用耦合吸附剂直接将L-乳酸耦合吸附出来，而将各种杂质留在残液中，由于本发明中的耦合吸附剂具有对L-乳酸的专一吸附性，达到一步提纯L-乳酸的目的，去除了现有工艺中的脱色工艺和绝大部分的离交工艺。